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- Cell Surface Staining Protocol (at R&D Systems)
- Intracellular Staining Protocol (Alcohols) (at R&D Systems)
- Intracellular Staining Protocol (Detergents) (at R&D Systems)
MagCellect™ 细胞选择试剂盒和试剂
通过基于磁珠的正向或负向选择法分离并富集细胞群体，无需专用柱。
特色 MagCellect 试剂盒
背景信息、常见问题解答、资源和产品
流式细胞术是一种高通量的单细胞分析技术，它使用激光在悬浮溶液中快速激活细胞表面结合的荧光标记的偶联抗体。该技术是一种强大工具，它可以对单个细胞测量多种参数，从数百万个细胞快速采集信息。在流式细胞术中，单细胞悬液穿过单束或多束激光时，光发生不同程度的散射。根据光的散射程度，可以对细胞群体进行分类，其中前向散射提供细胞大小分析，侧向散射确定细胞粒度。流式细胞术可提供细胞大小和体积信息、评估已分离细胞亚群的纯度、表征异质细胞群体中不同的细胞类型，同时也是一项可以检测细胞表面和胞内蛋白表达的技术。
荧光基团化合物（例如荧光标记的抗体或碘化丙啶）通常用于流式细胞术检测目的蛋白。同时使用多个荧光基团情况，只要最大发射光谱不重叠。也可以实现荧光染色细胞的分别检测。使用同型对照抗体作为阴性对照来验证流式细胞术实验。流式细胞术应用在多个研究领域，包括癌症生物学、免疫学、传染病监测、病毒学和分子生物学。
什么是 FACS？
流式细胞荧光分选技术是一种特有用途的流式细胞术。它提供一种将细胞混合物分选入多个单独容器的方法，一次一个细胞。该方法的细胞分选是基于细胞特定的光散射和荧光特征。
流式细胞术所需的最少细胞数目是多少？
特定实验所需的细胞数目根据您需求而定。相比于表达水平低的蛋白，如果您检测的抗原稳定高表达，需要细胞数目则相对较少。此外，相对于单色染色，多色流式实验则需要的细胞数量较多。但是，我们建议从每管每100µl染色液1×106个细胞开始。
流式细胞术中使用哪些对照？
流式细胞术对照分为以下类别。
- 仪器对照：仪器使用前，使用来自仪器制造商的校准颗粒或荧光珠，确保仪器性能正常。
- 补偿对照：进行多色流式细胞术时，来自所用不同荧光团的发射光谱可能重叠，并且可能扩散到其他通道。纠正溢出的过程称为补偿。为了补偿，实验中需要来自每种荧光色素的单份已染色样本。可以使用细胞、补偿微球或抗体捕获微球设置这些样本。
- 门控对照：流式细胞术数据分析最重要的一方面就是正确设门。荧光减一（FMO）对照是解读流式数据和设门所必需的。由于FMO对照在多色流式实验中提供可靠的背景评估，因此这些对照可以准确区分阴性细胞群体和阳性细胞群体。
- 细胞活力对照：死细胞可能产生假阳性，原因是死细胞的自发荧光，同时对抗体非特异性结合的亲和力升高。因此，这些死细胞需要从数据分析中消除。可以使用数种荧光染料（如7-AAD、Calcein AM 和碘化丙啶）区分死细胞与活细胞。
- 未染色细胞对照：多种细胞组分，如黄素辅酶和 NADPH，是显示自发荧光的内源性荧光团。借助流式细胞术运行未染色细胞的样本，将确定因自发荧光导致背景荧光的量，从而可以适当地设置门控消除影响。
- 同型对照：同型对照用于评估因抗体类别所致的非特异性结合。同型对照是一种对目的靶标缺乏特异性的抗体，但需要与一抗的类别、类型和荧光偶联物保持一致。