嗜乳脂蛋白作为免疫检查点蛋白
嗜乳脂蛋白可调节 T 细胞功能
嗜乳脂蛋白是最近发现的一类 T 细胞共抑制/共刺激分子,是免疫球蛋白超家族成员。这些蛋白质在结构上与 B7 家族具有相关性,似乎具有相似的免疫调节功能。在人类中,嗜乳脂蛋白家族包含七种嗜乳脂蛋白(BTN1A1、BTN2A1、BTN2A2、BTN2A3、BTN3A1、BTN3A2、BTN3A3)、五种嗜乳脂蛋白样蛋白(BTNL2、BTNL3、BTNL8、BTNL9、BTNL10)以及 SKINT 样 (SKINTL) 蛋白。在小鼠中,迄今为止已经发现了十一种嗜乳脂蛋白家族成员,包括 BTN1A1、BTN2A2、BTNL1-2、BTNL4-7、BTNL9-10 以及 SKINTL,尽管它们通常与其人类对应物有所不同。
除 BTN3A2、BTNL2 和 BTNL10 外,嗜乳脂蛋白具有一个 IgV 样胞外结构域和一个 IgC 样胞外结构域、一个跨膜区,还有一个 B30.2 胞内结构域,这是其与 B7 家族在结构上的主要区别。与其他的嗜乳脂蛋白家族成员相比,BTNL2 具有两个 IgV 样胞外结构域和两个 IgC 样结构域,没有 B30.2 胞内结构域,BTN3A2 和 BTNL10 也是如此。迄今已被鉴定的嗜乳脂蛋白中,大多数是通过作用于目前尚未明确的受体来抑制 T 细胞增殖和细胞因子生成。1-4有所不同的是 BTN3A2、BTNL8、BTN2A1 和 BTN3A1。研究显示,BTN3A2 可增强卵巢癌组织中 CD4+ 和 CD8+ T 细胞的上皮内浸润,而 BTNL8 被发现可促进抗 CD3 刺激的人 T 细胞增殖和细胞因子分泌。5, 6此外,BTN2A1 和 BTN3A1 最近已被证明参与了 Vγ9Vδ2 TCR 介导的应激细胞上磷酸抗原的识别,这导致了 γδT 细胞的主要外周亚群的活化。7-10虽然要确定许多其他嗜乳脂蛋白的关键结合配偶体以及它们调节 T 细胞功能的通路还需要进一步的研究,但这些蛋白质与 B7 家族成员之间在结构和功能上的相似性表明,应将嗜乳脂蛋白作为癌症免疫治疗的潜在靶标来进行研究。
Bio-Techne 专门提供大量 R&D SystemsTM 生物活性重组嗜乳脂蛋白,以及针对许多嗜乳脂蛋白家族成员的人或小鼠抗体,使研究人员能够进一步研究这些分子作为免疫检查点调节因子的功能。
嗜乳脂蛋白可介导 T 细胞共刺激和共抑制相互作用
嗜乳脂蛋白作为共信号分子调节 T 细胞活化。与 B7 家族类似,免疫球蛋白超家族的嗜乳脂蛋白家族成员蛋白质可调控 T 细胞增殖和细胞因子生成。迄今已被鉴定的大多数嗜乳脂蛋白,包括人 BTN1A1、BTN2A2、BTN3A1、BTNL2 和小鼠 BTNL1,都是通过作用于尚未明确的受体来抑制 T 细胞增殖和细胞因子生成。
R&D Systems 嗜乳脂蛋白的生物活性检测
BTN1A1 可抑制人 T 细胞中抗 CD3 诱导的 IL-2 生成。用固定化小鼠抗人 CD3 单克隆抗体(R&D Systems,目录号 MAB100;1μg/mL)和指定浓度的重组人 BTN1A1(R&D Systems,目录号 8467-BT)孵育人 T 细胞。使用人 IL-2 QuantikineTM ELISA 试剂盒(R&D Systems,目录号 D2050)测定细胞培养上清液中的 IL-2 分泌。这一作用的 ED50 通常为 0.5-2.5 μg/mL。通过 SDS-PAGE 分析,在还原 (R) 和非还原 (NR) 条件下评估了重组人 BTN1A1(R&D Systems,目录号 8467-BT;1 μg/泳道)的纯度(套印小图)。
BTN3A1 可抑制人 T 细胞中抗 CD3 诱导的 IL-2 生成。用固定化小鼠抗人 CD3 单克隆抗体(R&D Systems,目录号 MAB100;1μg/mL)和指定浓度的重组人 BTN3A1/CD277 Fc 嵌合体(R&D Systems,目录号 8539-BT)孵育人 T 细胞。使用人 IL-2 Quantikine ELISA 试剂盒(R&D Systems,目录号 D2050)测定细胞培养上清液中的 IL-2 分泌。这一作用的 ED50 通常为 1-5 μg/mL。通过 SDS-PAGE 分析,在还原 (R) 和非还原 (NR) 条件下评估了重组人 BTN3A1/CD277(R&D Systems,目录号 8539-BT;1 μg/泳道)的纯度(套印小图)。
BTNL9 可抑制人 CD4+ T 细胞增殖。使用 MagCellectTM 人 CD3+ T 细胞分离试剂盒(R&D Systems,目录号 MAGH101)从外周血单个核细胞 (PBMC) 中分离人 CD3+ T 细胞。用板结合的抗 CD3 与板结合的重组人 BTNL9 Fc 嵌合体(R&D Systems,目录号 9659-BT;10 μg/mL)或载体对照的组合处理 CFSE 标记 T 细胞,处理时长为 5 天。用 APC 偶联小鼠抗人 CD4 单克隆抗体(R&D Systems,目录号 FAB3791A)或 APC 偶联抗人 CD8 单克隆抗体(R&D Systems,目录号 FAB1509A)对细胞进行染色,并通过流式细胞仪门控。
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